Флуоресцентная микроскопия и использование флуоресцентных насадок 

Флуоресцентная микроскопия — это специализированный вид световой микроскопии, основанный на явлениях флуоресценции или фосфоресценции. Эти термины описывают материалы, которые поглощают свет (фотоны) одной длины волны, а затем переизлучают свет второй, более длинной волны.

В флуоресцентной микроскопии используются оптические фильтры, освещающие образец одной длиной волны и избирательно детектирующие только одну длину волны света, возвращающегося от образца.

Таким образом, любая часть образца, поглощающая свет при длине волны освещения и излучающая его при длине волны детектирования, будет видна наблюдателю. Это обеспечивает мощную технику контраста, недоступную в других типах микроскопов.

Некоторые материалы (известные как "автофлуоресцентные") проявляют флуоресценцию естественным образом и не нуждаются в специальной подготовке для флуоресцентной микроскопии. Обнаружение автофлуоресцентных материалов в основном зависит от выбора соответствующих фильтров, соответствующих естественным длинам волн возбуждения и испускания.

Для большинства практических образцов флуоресцентные красители, известные как флуорофоры, которые проявляют относительно интенсивную флуоресценцию при определенных длинах волн, используются для маркировки отдельных частей образца.

Это похоже на то, как обычные оптические красители или пятна используются в световой микроскопии. Эти флуорофоры могут быть чрезвычайно избирательными, вплоть до того, что в некоторых случаях удается обнаружить отдельные молекулы.

Благодаря высокой степени контрастности, достигаемой при использовании флуорофоров, флуоресцентная микроскопия стала важным инструментом в науках о жизни.

Широкопольная эпифлуоресцентная микроскопия и флюоресцентные насадки

В этом методе весь образец освещается светом одной длины волны (длина волны возбуждения) в одно время. Те части образца, которые флуоресцируют на этой длине волны, поглощают ее, а затем переизлучают на другой длине волны (длина волны эмиссии).

Возбуждающий свет может также отражаться от образца или проходить сквозь него. Основные элементы этого микроскопа очень похожи на обычный микроскоп отраженного света.

Однако флуоресцентные микроскопы содержат дополнительную оптику, показанную на рисунке ниже, которая обеспечивает освещение образца только длиной волны возбуждения и позволяет свету с длиной волны испускания достигать детектора или наблюдателя. 

Широкопольные эпифлуоресцентные микроскопы — самые простые и распространенные из флуоресцентных микроскопов. Флюоресцентные насадки делают эпифлуоресцентную микроскопию простым дополнением к существующему оптическому микроскопу.

Схема оптического тракта в простом широкопольном эпифлуоресцентном микроскопе.